技術(shù)原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats）是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術(shù)。在這一系統(tǒng)中，sgRNA引導(dǎo)序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA 進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠡蚪M特定基因位點進行精確編輯，目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術(shù)應(yīng)用于小鼠基因敲除/敲入模型制備，以及條件性敲除（Loxp系統(tǒng)）模型制備。
目前瑞思元采取優(yōu)化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優(yōu)化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應(yīng)降到最低。
條件性基因敲除小鼠
應(yīng)用sgRNA-Cas9和donor的方法將loxP敲入到目的基因兩側(cè)，依賴于Cre酶進行條件敲除。
運用
研究完全性敲除后致死性目的基因的生理或病理功能；
研究目的基因在特定組織或細胞中的功能；
研究目的基因在特定時期或特定階段發(fā)揮的作用；
技術(shù)優(yōu)勢
研發(fā)周期短（4-6個月），同源重組效率高；
打破對小鼠遺傳品系的限制，可以實現(xiàn)不同遺傳背景或在已有基因修飾小鼠模型基礎(chǔ)上進行基因編輯；
制備流程
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