CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)平臺

CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng) CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Pal indromic Repeats)是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導(dǎo)Cas9核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術(shù)。CRISPR/Cas9靶向基因組編輯系統(tǒng)由內(nèi)切核酸酶-Cas9 和指導(dǎo)RNA-gRNA兩部分組成。Cas9/gRNA復(fù)合物特異性識別DNA靶點，切割雙鏈DNA的活性結(jié)構(gòu)域，使得雙鏈DNA斷裂。 CRISPR/Cas9系統(tǒng)產(chǎn)生雙鏈缺口后一般采用非同源末端連接（NEHJ）或同源定向修復(fù)（HDR）對含缺口的雙鏈DNA進行修復(fù)。NHEJ修復(fù)途徑是一種錯誤傾向修復(fù)機制，用于在缺少修復(fù)模板的情況下修復(fù)斷裂的雙鏈DNA，該途徑主要用于CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的基因沉默。同源性定向修復(fù)（HDR）途徑則是在引入同源性DNA模板的情況下，通過同源重組的方式將DNA模板精確地插入到編輯地基因組位點，從而實現(xiàn)對基因組特定基因位點進行精確編輯。